產(chǎn)品名稱：鐵離子比色法檢測試劑盒

產(chǎn)品貨號：XFP10451

產(chǎn)品規(guī)格：100T

儲存條件：4℃保存

細(xì)胞鐵離子檢測試劑盒可用于培養(yǎng)細(xì)胞中鐵離子定量檢測。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細(xì)胞鐵離子，線性范圍5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空白對照，本試劑盒可進(jìn)行100個樣品的檢測。鐵是人體必需的元素之一，對人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就會造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細(xì)胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵3～5克，大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在，極少部分以離子的形態(tài)存在。

檢測原理：

鐵與蛋白結(jié)合成復(fù)合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來，再被還原劑還原成二價鐵， 并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在 540-580nm 處可比色測定。

產(chǎn)品組成：

 A. 細(xì)胞裂解液： 20 ml

B. 緩沖液： 5ml

C. 檢測劑： 3ml

D. 標(biāo)準(zhǔn)品： 1ml

E. 稀釋用液： 20ml 

實驗步驟：

1.  樣品準(zhǔn)備（以24孔板為例）：

將含鐵元素DMEM培養(yǎng)過的細(xì)胞用冷的PBS 2ml洗兩遍，將PBS吸棄（若不馬上檢測可將其凍存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解2h。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。

3.  將緩沖液與4.5%高錳-酸鉀溶液按1:1混勻，稱為混液A。 注意：用戶自備4.5%高錳-酸鉀溶液 5ml。

4.  參考下表使用1.5ml離心管，設(shè)置空白對照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高，用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。

                           空白對照         稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品   裂解的樣品

稀釋用液                        100μl               － 

混液A                         100μl             100μl                        100μl

樣品                                   －                         －                        100μl

標(biāo)準(zhǔn)品工作液                   －                     100μl                            －

5.  混勻，60℃ 孵育1h。

6.  冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。

7.  加入30ul 鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。

8. 取200ul 于96孔板，在550nm測定吸光度。如果不能測定550nm，也可以在540nm~580nm范圍內(nèi)檢測。

9.  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算鐵離子濃度。

 本產(chǎn)品僅供科研實驗用，不做其它用途！

鐵離子比色法檢測試劑盒