無機(jī)磷檢測(cè)試劑盒(紫外微板法)的參考區(qū)間

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

血清中的無機(jī)磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-兩種磷酸根陰離子組成，上述陰離子在在不同的 pH 環(huán)境下能快速相互轉(zhuǎn)換，在 pH7.4 血清中兩種磷酸根陰離子濃度比例為 1:4；在酸中毒環(huán)境下二者濃度約為 1:1；在堿中毒環(huán)境下二者濃度比例為1:9；在 pH4.5 尿液中濃度比例為 100:1。WHO 推薦的常規(guī)檢測(cè)方法為比色法，我國(guó)衛(wèi)生部臨檢中心推薦的常規(guī)方法為硫酸亞鐵鉬藍(lán)比色法和米吐爾鉬藍(lán)比色法，亦可采用紫外分光光度法。無機(jī)磷檢測(cè)試劑盒(紫外微板法)無需處理樣本，利用無機(jī)磷與鉬酸銨結(jié)合生成磷鉬酸銨，通過酶標(biāo)儀直接檢測(cè) 325～340nm 處吸光度，根據(jù)公式計(jì)算出無機(jī)磷含量。紫外法優(yōu)點(diǎn)在于：操作簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定；缺點(diǎn)在于：易受溶血、黃疸、脂血的干擾。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

操作步驟(僅供參考)：

1、(選做)制備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，-20℃

凍存，用于 Pi 的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于

Pi 的檢測(cè)。

③高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的 Pi，可以使用 ddH2O 稀釋，不宜使用普通

蒸餾水稀釋。

④(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)

算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 Pi 含量。

2、制備磷標(biāo)準(zhǔn)工作液：取適量的磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)：磷標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1：

39 的比例稀釋，即獲得磷標(biāo)準(zhǔn)工作液(25 μg/ml=0.807 mmol/L)，4℃保存，用于 Pi的檢測(cè)。

3、制備鉬酸銨顯色液：稱取適量的鉬酸銨粉末，按照鉬酸銨粉末：鉬酸銨稀釋液(2×)：去

離子水=12mg：10ml：10ml 的比例混合溶解，即可使用。亦可稱取 120mg 鉬酸銨粉末加入 100ml 去離子水，充分溶解后分裝成 10ml 或適當(dāng)規(guī)格的小份，使用時(shí)與鉬酸銨稀釋液(2×)等比例混合即可使用，-20℃保存，可適當(dāng)延長(zhǎng)保質(zhì)期。鉬酸銨顯色液配制后可 4℃保存 2 周，如溶液變渾濁或顏色加深則應(yīng)棄用。請(qǐng)注意，本產(chǎn)品提供多于實(shí)際用量的鉬酸銨粉末。

4、Pi 加樣：按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避

免產(chǎn)生氣泡，小心混勻。如果樣品中的無機(jī)磷濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。

5、Pi 測(cè)定：混勻，室溫靜置 5min，以空白調(diào)零，酶標(biāo)儀 340nm 處測(cè)定，讀取標(biāo)準(zhǔn)孔、

測(cè)定孔的吸光度(即為 A 標(biāo)準(zhǔn)，A 測(cè)定)。

計(jì)算：

血清、血漿中無機(jī)磷計(jì)算公式：磷=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn))×0.807×N(mmol/L)

=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn))×25×N(mg/L)

尿液中無機(jī)磷計(jì)算公式：磷=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn))×0.807×N(mmol/L)

=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn))×25×N(mg/L)

組織中磷計(jì)算公式：磷(mmol/mg)=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn))×0.807×N /c

式中：A 測(cè)定=測(cè)定管的吸光度

A 標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度

N=樣品稀釋倍數(shù)

c=待測(cè)樣品蛋白濃度(mg/L)

單位換算：1 mg/dL=10 mg/L=1 mmol/L×0.323

參考區(qū)間：健康成年人血清磷濃度：0.9～1.34mmol/L(2.76～4.16mg/dl)

注意事項(xiàng)：

1、 本法應(yīng)在 5min～2h 內(nèi)檢測(cè)，3h 后標(biāo)準(zhǔn)管吸光度無變化，測(cè)定管吸光度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而上升。

2、 溶血樣本對(duì)檢測(cè)有干擾，盡量避免采用溶血樣本。

3、 黃疸和脂血樣本應(yīng)做標(biāo)本空白。

4、 本法能夠用于自動(dòng)生化分析儀終點(diǎn)檢測(cè)法。

5、 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)

6、 340nm 測(cè)得的吸光度是 325nm 的 82%。

7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。

無機(jī)磷檢測(cè)試劑盒(紫外微板法)的參考區(qū)間